Application Note ImageXpress ベロスシステム -HTS

ウォークアウェイ機能のための自動プレートハンドリング

はじめに

モレキュラーデバイスは、細胞ごとにウェル全体を画像化する装置を提供することで、細胞およびアレイベースのアッセイを真のハイスループット・スクリーニング速度で進めています。ImageXpress® Velosシステムは、高含量セルベースアッセイ、コロニー形態学研究、マルチプレックススポットおよびビーズアレイ用の独自の収集光学系を備えたレーザー走査型マイクロプレートイメージングシステムです。アッセイは6-1536ウェルのプレート密度で実行できる。ここでは、Twister IIマイクロプレートハンドラー（マサチューセッツ州ホプキントン、キャリパーライフサイエンス社製）と統合されたImageXpress Velosシステムレーザースキャナーによる "walk-away "プレート処理のためのAutorunソフトウェア機能の実装について報告する。

Twister II マイクロプレートハンドラーの統合は、ImageXpress Velos システムに自動化を提供する。つの3ラックポッドを持つ基本構成は、80マイクロプレートまでのプレート容量を提供し、320プレートまで扱うために追加ポッドで拡張可能である。ハンドラーアームは5軸の動きを提供し、アームの伸長は8.5インチ、手首の回転は270°で、どのようなソース／デスティネーション構成にも対応します。スキャンおよびロード/アンロード速度は、ウェル密度に関係なく、10ミクロンサンプリングでプレートあたり3～4分のサイクルタイムを実現します。ImageXpress Velos システム-HTS は、標準的なラボベンチに収まる小さなフットプリントです（図 1）。

Autorun ユーザーインターフェースは柔軟で使いやすい。ImageXpress Velos System-HTS は、プレート識別、追跡、ファイル名付与のためのバーコードリーダーをオプションで設定することができます。室温インキュベーションとプレートスキャンによる遅延をアッセイメソッドに組み込むことができます。本システムは、プレートの蓋の有無にかかわらず実行でき、プレートごとに最大 4 つの別々の ImageXpress Velos System メソッドを、数分または数時間にわたるカイネティクスのために時間設定された繰り返しで実行できます。例えば、Mitotic Count アッセイ（アプリケーションノート No.8）では、1 つの ImageXpress Velos システムメソッドで、2 色画像処理による自動有糸分裂細胞定量に必要なすべての画像取得、画像解析、およびアッセイ基準を定義します。

オートラン 強力な機能と使いやすいインターフェース

Twister II マイクロプレートハンドラーと共に ImageXpress Velos System を使用することで、自動プレートハンドリング用のセットアップに Autorun を選択することができます。Setup/ Run メニューオプションで簡単にセットアップできます（図 2）。

• Setup/Run ウィンドウを開くと、利用可能なステーションが緑色で表示されます。「ネスト」は ImageXpress Velos System 装置（プレートネスト）、バーコードリーダース テーション（マイクロプレートをスキャンするために存在する場合）は「バーコード」、デリッドエ リアは「リッド」と呼ばれます。Twister IIに設定されているラック数も緑色で表示されます。
• No. of cycles（サイクル数）により、各プレートを最大41回までスキャンできます。1より大きい 数を指定した場合、各スキャン間の遅延時間を選択する必要があります。各スキャン間の遅延時間は1～4,096分（68時間）の間で入力できます。
• エラーで中止（Abort on Error）を選択すると、実行中に致命的なエラーが発生した場合に自動実行プログラムが停止します。エラーはオートランのログファイルに記録され、ユーザーが介入してプログラムを再起動するまで、すべてのプレートアクティビティが停止します。
• システムにバーコードリーダーが検出されている場合、Use Barcodesを有効にすると、各プレートはImageXpress Velos Systemのプレートトレイにセットされる前にバーコードリーダーでスキャンされます。

セットアップラックオプション

• No. of Plates（プレート数）は、自動的に実行するプレート数を選択するか、Do All（すべて実行）ボックスをチェックすると、ラック内のすべてのプレートがスキャンされ、目的のラックに送られます（図3）。
• Restack を有効にすると、ImageXpress Velos System でのスキャン後、プレートを元の順序でソースラックに戻すことができます。再スタックする前に、終了したプレートを受け取るために、ラックの 1 つを常に空にしておく必要があります。Restackがチェックされている場合、実行するように設定されたラック内のすべてのプレートが読み取られ、デスティネーションラックにスタックされた後、プレートはその後ソースラックに再スタックされます。 /li>
• Remove Lids（蓋の除去）は、蓋の除去ステーションが検出された場合に有効になります。Remove Lids をチェックすると、ImageXpress Velos System にロードする前にプレートの蓋が外されます。
• 図 3に示すように、各プレートのスキャン、分析、データ保存に最大 4 つのメソッドを使用できます。

オートラン詳細設定

Autorun プルダウンメニューの Advanced オプションでは、ImageXpress Velos System-HTS を "シミュレー ト "ロボットモードで使用することができます。（図 4）この機能は、速度論的研究を行う際に異なる時間間隔でプレートをスキャンしたり、最大 4 種類のメソッドでプレートを読み取ったりするのに便利です。プレート上の自動時系列読み取り、またはプレート上の複数のメソッドのセットアップと実行は、プレート操作ロボットを実際に使用する場合と同じです。

結果と考察

Autorunを実証するために、96ウェルプレート中のパクリタキセル処理したHeLa細胞を固定、透過処理し、ヒストンH3のSer28のリン酸化に対する有糸分裂マーカー抗体（Active Motif; Carlsbad, CA）で免疫染色した。リン酸化ヒストンH3に対する一次抗体は、Alexa Fluor-488 (AF488; Invitrogen; Carlsbad, CA)で標識した二次抗体でプレート上半分のA-D列を選択した（選択したウェルは図3の青い輪郭を示す）。E-H行の二次抗体はChromeon 488 (Ch488; Active Motif)で標識した。

図3 は、4 つの ImageXpress Velos System Methods と Autorun の使用を示しています。それぞれ10 x 10または5 x 5ミクロンサンプリングで96ウェルプレートのA～D列（図3では選択されたウェルが青い輪郭で示されている）から2色画像を取得するためにMethod MI AF488- 10およびMethod MIAF488-5で選択されたウェル。Method MI Ch488-10およびMethod MI Chr488-5は、それぞれ96ウェルプレートのE～H列から10 x 10または5 x 5ミクロンサンプリングで画像を取得します。

画像取得および2色画像処理による有糸分裂指数（MI）細胞の自動定量については、アプリケーションノートNo.8「High-Throughput Two-Color Mitotic Index Assay」に記載されています。ウェル全体の画像は、赤（PI染色）チャンネルで細胞を同定し、緑（AF488またはCh488）チャンネルと赤チャンネルのバックグラウンド補正積分蛍光強度を用いて、細胞ごとに解析した。Autorun を使用すると、ウェル画像、各ウェルの細胞ごとのデータを列挙したリストファイル（.csv）、およびプレートレイアウト形式で有糸分裂細胞のパーセンテージを示した要約テキストファイルが自動的に保存されます。

概要

ImageXpress Velos システム-HTS は、自動マルチプレート、マルチスキャン、マルチメソッドのウォークアウェイ処理に重要な柔軟性を備えた、画像取得と解析が統合された完全自動化でありながらコスト効率の高いベンチトップシステムを提供します。ImageXpress Velosシステム- HTSは、カスタムプレートローダーに代わる時間の節約と、大型で複雑な統合システムに代わるコスト削減を提供します。また、大型で複雑な統合システムよりもコスト削減が可能です。

ImageXpress Velos System-HTSは、高スループット条件下での画像解析手順の開発、実行、検証に重要な柔軟性を備えた、画像取得および解析モジュールが統合された使いやすい自動プレート処理プラットフォームを必要とするラボにとって魅力的なソリューションです。このプラットフォームは、シンプルな "プラグ・アンド・プレイ "アプリケーションを可能にし、学術界と産業界の両方におけるライフサイエンス研究のニーズを満たします。BBIでは、お客様の特定のアプリケーションについてご相談を承ります。アッセイ開発、バリデーション、自動化において完全なカスタマーサポートを提供いたします。

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