QBT脂肪酸取り込みアッセイキット
QBT脂肪酸取り込みアッセイキット
QBT™ Fatty Acid Uptake Assayは、ハイスループットスクリーニングに適したホモジニアスアッセイです。キットは、脂肪酸トランスポーターのアッセイ開発とスクリーニングを迅速化するために、あらかじめ最適化された蛍光ベースの処方を提供します。
QBT脂肪酸取り込みアッセイキット
- ・ワンステップの均一性アッセイフォーマットにより、ハイスループットスクリーニングが可能。
- ・特許取得済みクエンチ技術を用いた蛍光アッセイにより、生細胞でのリアルタイム取り込みカイネティックをモニターすることができる。
- ・煩雑で時間のかかる蛍光および放射性アッセイプロトコルに取って代わる
- ・放射性化合物を使用しないため、廃棄コストが削減され、放射性アッセイに伴う安全性リスクが排除されます。
放射能を用いて脂肪酸の取り込みをモニターする従来のプロトコールは、多くの場合、細胞の溶解と超低温での処理を必要とするため、高価で時間がかかり、ハイスループットスクリーニングには不向きである。他の蛍光ベースのプロトコールでは、一般的に低スループットの蛍光活性化セルソーター（FACS）インストゥルメンテーションを使用するか、細胞洗浄を必要とするため、これらのアッセイで使用される脆弱な脂肪細胞の完全性が著しく損なわれる可能性がある。
QBT脂肪酸取り込みアッセイは、BODIPY®-ドデカン酸蛍光脂肪酸アナログと当社特許取得済みのクエンチ技術を組み合わせて使用する。BODIPY標識は、天然脂肪酸とよく似た挙動を示し、脂肪酸トランスポーターの基質として知られている理想的な長鎖脂肪酸アナログを提供します。
QBT脂肪酸取り込みアッセイキットのデータ
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線維芽細胞と脂肪細胞の比較
3T3 L1脂肪細胞を96ウェルプレートに100μlのDMEM/FBSに50,000セル/ウェルでプレーティングし、37℃で5時間インキュベートした。その後、増殖培地を脂肪酸取り込み溶液に交換した。カイネティック測定はMolecular Devices FlexStation® 3 Readerで直ちに開始した。A：脂肪細胞；B：線維芽細胞；C：細胞なし（取り込み試薬のみ）。 -
線維芽細胞対脂肪細胞；インスリン用量反応
3T3 L1脂肪細胞を96ウェルプレートに100μlのDMEM/FBSに50,000セル/ウェルでプレーティングし、37℃で5時間インキュベートした。異なる濃度のインスリンをウェルに添加し、37℃、5％CO2インキュベーターで30分間インキュベートした。インキュベーション時間のエンドツーエンドで、100μlの脂肪酸混合物をウェルに加え、直ちにFlexStation® 3 Readerでカイネティック測定を開始した。トレースAからFは、それぞれ160、16、8、1.6、0.16、0 nMのインスリンを投与した脂肪細胞に対応し、トレースGとHは、それぞれ0と160 nMのインスリンを投与した線維芽細胞に対応する。 -
レプチン阻害効果
3T3L1脂肪細胞を96ウェルプレートに50,000セル/ウェル/100μlのDMEM/FBSで5時間プレーティングした後、レプチン（100nM）の有無にかかわらず1時間血清遮断した。その後、10 nMのインスリンをウェルに添加し、37℃、5% CO2インキュベーターでさらに30分間インキュベートした。インキュベーション時間のエンドツーエンドで、100μlの脂肪酸をウェルに加え、FlexStation® 3 Readerでカイネティック測定を直ちに開始した。データ提供：Cambridge Biotechnology社。A：インスリン、B：インスリンとレプチン、C：基礎。
QBT脂肪酸取り込みアッセイキットの技術
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アッセイ原理
QBT脂肪酸取り込みアッセイキットには、蛍光脂肪酸アナログを封じ込めたローディングバッファーと、細胞外空間の蛍光を大幅に減少させるクエンチング色素が含まれています。ローディングバッファーがセルに添加されると、蛍光脂肪酸アナログの細胞内への輸送により蛍光シグナルが増加し、下方測定を行う蛍光マイクロプレートリーダーを用いてリアルタイムでモニターされる。試験化合物によって脂肪酸の輸送が阻害されると、コントロールに比べて蛍光シグナルが減少する。
QBT脂肪酸取り込みアッセイキットを支援する製品・サービス
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SpectraMax iD3/iD5 マルチモードマイクロプレートリーダー
大型タッチスクリーンを備えた高感度マイクロプレートリーダー
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Gemini XPSおよびEM マイクロプレートリーダー
フィルター不要の蛍光検出
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FlexStation 3 マルチモードマイクロプレートリーダー
イオンチャネル・GPCR活性の測定に威力を発揮する
自動マルチチャンネルピペッター搭載マルチマイクロプレートリーダー -
SpectraMax Paradigm マルチモードマイクロプレートリーダー
高速で設定可能なマイクロプレートリーダー1台でハイスループットスクリーニングが可能
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SpectraMax i3x マルチモードマイクロプレートリーダー
研究ニーズに合わせて進化できるマイクロプレートリーダー
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FLIPR Penta ハイスループットセルベーススクリーニングシステム
リード化合物の同定および化合物の安全性評価を目的とした
ハイスループットカイネティックスクリーニングに理想的なシステム -
SpectraMax Mシリーズ マルチモードマイクロプレートリーダー
妥協ない性能と低価格を両立したマルチモードマイクロプレートリーダー
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SpectraMax Mini マルチモードマイクロプレートリーダー
妥協ない性能と低価格を両立したマルチモードマイクロプレートリーダー