Fura-2 QBTカルシウムキット
Fura-2 QBTカルシウムキットとは
アッセイのアーチファクトを心配する研究者のために、Fura-2 QBT™ カルシウムキットは、カルシウム動員を正確に測定するために、業界標準のFura-2レシオメトリックカルシウムインジケーターに当社特許取得済みマスキング技術を採用した、混合＆測定形式のシンプルなキットです。
Fura-2 QBTカルシウムキット
- ・利用可能な最大のFura-2シグナルウィンドウを見る
- ・洗浄アーチファクトを排除し、ホモジニアスアッセイでスループットを向上。
- ・色素の不均一なロードやリークが結果に与える影響を最小限に抑える。
- ・無洗浄プロトコルを用いた低密度、弱い、あるいは接着していない細胞の検査
- ・FlexStation® 3およびFLIPR® Tetraシステムでのアッセイ
- ・Fura-2が細胞株やターゲットに使用された数千の引用文献を参照。
Fura-2 QBTカルシウムキットは、Fura-2を使用する従来の洗浄プロトコールと比較して、データのばらつきの原因を排除し、ステップ数を削減します。業界標準のFura-2レシオメトリックカルシウムインジケーターと当社特許取得済みマスキング技術を活用することで、研究者は以下のことが可能になります：
Fura-2 QBTカルシウムキットのデータ
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CHO M1細胞上のムスカリンM1受容体のアゴニズム
FlexStation® 3 マルチモードマイクロプレートリー ダーで、カルバコールを使ってCHO M1細胞の ムスカリンM1受容体を刺激し、濃度反応曲線 （CRC）を作成し、Fura-2 QBT DyeとBDキットおよび 従来のFura-2洗浄プロトコルを比較した。EC50値はどの方法でも同様で、公表値の範囲内であった。 -
CHO M1セルにおけるムスカリンM1受容体の拮抗作用
FlexStation 3 マルチモードマイクロプレートリーダーで、50 nMカルバコール をアゴニストチャレンジとし、アトロピンのアンタゴニスト CRCを比較した。この実験では、Fura-2 QBTカルシウムキットが、EC80において最も大きなシグナルウィンドウと最もロバスト性の高いZファクターを提供した。 -
HeLa細胞における内因性H1受容体のアゴニズム
ヒスタミンを用いてHeLa細胞の内因性ヒスタミン受容体を刺激した。アッセイは、UV LEDを備えたFLIPR Tetra® ハイスループット細胞スクリーニングシステムを用いて測定した。Fura-2 QBT DyeとBDレシオメトリックカルシウムキットおよび従来のFura-2洗浄プロトコルを比較した濃度応答曲線（CRC）を作成。EC50値はHalf-log以内であったが、EC80におけるZファクターはFura-2 QBT Calcium Kitが最大であった。 -
HeLaセルにおける内因性H1受容体の拮抗作用
アッセイは、FLIPR Tetraハイスループット細胞スクリーニングシステム（UV LED付き）を用いて測定し、図3と同様の実験セットアップとシステム設定を用いた。40nMのヒスタミンをアゴニストとして、CRCのピリラミンをアンタゴニストとして用いた。
Fura-2 QBTカルシウムキットの技術
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アッセイキットのメカニズム
Fura-2 QBTカルシウムキットは、インキュベーション中に細胞質に吸収され、親油性のブロッキング基が切断され、負に帯電した蛍光色素となって細胞内に留まるカルシウム感受性色素Fura-2を使用しています。標的が活性化すると、細胞内のカルシウムが放出され、色素と結合して蛍光強度が増加する。このキットは細胞外マスキング技術を利用しており、バックグラウンド蛍光をブロックし、アッセイのシグナルウィンドウを拡大し、アッセイステップを減少させる。 -
カルシウム-フラックスシグナルの変化
カルシウム結合型Fura-2は340/510 nmで励起され、非結合型は380/510 nmで励起される。カルシウムが流入すると、細胞質のカルシウム濃度が上昇し、それに比例して340/510 nmの蛍光強度が増加する。対照的に、380/510 nmの強度は、結合していない色素の濃度が減少するのに同期して減少する。2つの波長での励起によって生じる蛍光強度を比べることで、色素の不均一な分布やセル数のばらつきに関連するアーチファクトは、両方の測定に等しく影響するため最小化される。 -
Ca2+ に結合したFura-2 QBTカルシウム色素のスペクトルシフト
Fura-2 QBT™ カルシウム色素は340nmと380nmで励起し、510nmでExcitationします。カルシウムフラックスにより、細胞内カルシウム濃度の変化を測定することができます。
