Application Note SpectraMaxマルチモードマイクロプレートリーダー用に
最適化されたHTRF設定

はじめに

シスビオのHTRFアッセイは、Gタンパク質共役型受容体、キナーゼ、細胞シグナリング、エピジェネティクス、バイオマーカーの領域を網羅するように進化してきました。タンパク質間相互作用、核内レセプターアッセイ、レセプター二量体化、リガンド結合、レセプター内部化、酵素アッセイなど、様々なtoolbox試薬やキットをご用意しております。

HTRFでは、ドナー蛍光体とアクセプター蛍光体という2つの蛍光体を用いて、タンパク質やその他の目的の生体分子を標識する。生体分子が相互作用すると、その近接によってドナー蛍光体からアクセプター蛍光体への蛍光共鳴エネルギー移動（FRET）が起こる。ドナーとして長寿命の蛍光性ランタニドクリプテートを用いることで、HTRFアッセイの時間分解蛍光検出が可能になり、化合物や他の物質からの短寿命バックグラウンド蛍光を最小限に抑えることができる。時間分解FRET（TR-FRET）をマイクロプレートリーダーで検出することにより、生体分子の結合を読み出すことができる。

最高の HTRF 結果を得るには、シスビオが設定した HTRF 性能仕様を満たすことが検証されたマイクロプレートリーダーが必要です。リーダーの光学系、エネルギー源、検出器、および HTRF 検出に使用する設定はすべて性能に影響する。当社のリーダーは、SpectraMax i3x® および Paradigm マルチモードマイクロプレートリーダー用のHTRF検出カートリッジ、SpectraMax iD5 リーダー用の改良TRFモジュールとバリデーション済みフィルターなど、HTRF検出用に最適化されたコンポーネントを使用しています。

シスビオのHTRF認証プログラムは、「HTRF適合」ロゴの付いたリーダーがHTRFの最適な性能に必要な特異性を満たしていることを保証するものです。このテクニカルノートでは、Molecular Devices社製HTRF適合マイクロプレートリーダーのためにシスビオが検証した最適化設定を紹介します。

Molecular Devices HTTRF適合マイクロプレートリーダー

• SpectraMax® i3x マルチモードマイクロプレートリーダー
  ◦HTRF検出カートリッジ（Molecular Devices P/N 0200-7011、またはTb/green用のカスタムTR-FRET）
• SpectraMax® iD5マルチモードマイクロプレートリーダー
  ◦HTRF検出システム（Molecular Devices P/N 6590-0144、改良TRFモジュール、励起およびリングフィルターを含む）
• SpectraMax® Paradigm® マルチモードマイクロプレートリーダー
  ◦HTRF検出カートリッジ（Molecular Devices P/N 0200-7011、またはTb/green用カスタムTR-FRET）
• SpectraMax® M5e マルチモードマイクロプレートリーダー
• FlexStation® 3 マルチモードマイクロプレートリーダー

読者セットアップの推奨について

HTRFアッセイには3種類のドナー／アクセプター蛍光体の組み合わせがあり、最適な結果を得るためには、それぞれ特異性のあるリーダー設定が必要である：

• ユーロピウムクリプテートドナー/レッドアクセプター（Eu/red）
• テルビウムクリプテートドナー/赤アクセプター（Tb/赤）
• クリプ酸テルビウムドナー／緑アクセプター（Tb/緑）、 Tag-lite

SpectraMax i3/i3xリーダー

SpectraMaxパラダイムリーダー

SpectraMax iD5リーダー

SpectraMax M5eおよびFlexStation 3リーダー

結論

時間分解蛍光検出機能を備えたSpectraMaxマルチモードマイクロプレートリーダーは、Cisbio社の標準的な認証方法によりHTRF性能の完全な試験を受け、HTRF認証の要求基準を上回る優れた性能を示しました。最適化された検出カートリッジまたはフィルターは、Tag-liteを含むあらゆるHTRFアッセイをサポートします。