Application Note AquaMax 2000/4000マイクロプレートウォッシャーと
LifeSepマグネットプレートホルダーによる
MAGPIXビーズのプレーティング

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  • ハイスループットなビーズベースのマルチプレックスに最適化された洗浄
  • 洗浄ビーズの優れた保持
  • 柔軟性の高い洗浄設定
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PDF版（英語）

はじめに

MAGPIXマルチプレックスシステムは、1時間で最大4800の結果が得られるハイスループットなマルチプレックス機能を提供します。このようなアッセイの最適なパフォーマンスを確保するには、マイクロプレートウェル内でのビーズの保持を最大化しながら、MAGPIX ビーズを効率的に洗浄することが不可欠です。Molecular Devices®のAquaMax® 2000/4000マイクロプレートウォッシャーでは、本書で説明する最適化された設定により、少なくとも95%のビーズ保持が可能です。

図 1. MAGPIXマルチプレックスシステムとLifeSepマグネットプレートホルダーを使用したAquaMax 4000マイクロプレートウォッシャー。

材料

  • MAGPIXキャリブレーションキット（ライフテクノロジーズ、カタログ番号MPX-CAL-K25）
  • リン酸緩衝生理食塩水（PBS）
  • LifeSep 96F マグネティックプレートホルダー（Dexter Magnetic Technologies 社製、Cat. #2501008-1）
  • 96ウェルクリアマイクロプレート（Greiner社製）
  • ImageXpress ® Velos ™ スキャニングサイトメーター（Molecular Devices社製

方法

ステップ 1. ビーズをPBSで1:50に希釈し、96ウェルマイクロプレートの各ウェルに100μLずつピペッティングする。

ステップ2. 洗浄前のマイクロプレートをImageXpress Velos Cytometerで読み取り、開始ビーズ数を求める。

ステップ3. AquaMax マイクロプレートウォッシャーのセットアップ： オンボードソフトウェアで新しいプレートを作成。96ウェルGreinerプレートで開始し、高さを24.2 mmと入力した（通常のプレートの高さ＋LifeSepアダプターの高さ10 mm）。Well Depth Auto機能を使って正確なウェルの深さを決定し、その結果をプレート定義に保存した。

ステップ4. AquaMax 4000 WasherでプレートをPBSで洗浄しました。以下のパラメータで最良の結果が得られました（洗浄中のビーズの損失が最小限）：

吸引

  • 位置：エッジ
  • 速度：中
  • 下降速度：3
  • 高さ: 5 mm

ディスペンス

  • 容量：150 mL
  • レート：5
  • ステップ1から2回繰り返します。
  • アスピレート（上記設定）

ImageXpress® Velos™ スキャニングサイトメーターで、532 nmのレーザーを用いて蛍光をスキャンした。ImageXpress Velos Cytometer ソフトウェアを使用して、洗浄前と洗浄後のウェルごとに検出された対物レンズの数を決定した。

96ウェルマイクロプレートの洗浄前ビーズ数

ウェルあたりの平均ビーズ数 = 615

   1 2 3 4  5 6  7  8  9  10  11  12
A 603 618 639 607 588 642 586 536 612 610 626 587
B 643 652 641 623 630 607 574 657 621 623 622 636
C 621 585 650 598 638 550 604 632 621 577 586 605
D 592 607 633 595 633 620 592 633 621 622 578 591
E 589 651 635 648 629 617 631 634 610 590 610 610
F 577 596 628 574 598 575 643 623 615 602 602 546
G 639 602 600 645 682 608 585 622 600 652 600 596
H 658 634 635 642 643 643 629 647 622 604 641 628

96ウェルマイクロプレートの洗浄後ビーズ数

ウェルあたりの平均ビーズ数 = 585
保持率 = 95.1

   1 2 3 4  5 6  7  8  9  10  11  12
A 584 572 599 597 580 621 554 552 608 605 566 515
B 634 630 643 548 622 579 608 613 535 540 598 616
C 563 590 641 591 602 575 560 594 622 533 576 554
D 495 593 568 513 605 600 587 551 573 577 499 568
E 527 618 607 634 578 593 605 604 640 575 479 539
F 575 540 621 576 595 554 607 605 617 603 574 586
G 544 577 561 567 630 621 625 595 594 626 571 506
H 608 606 546 616 625 599 628 625 611 566 599 613

図2. 洗浄前後の代表ウェルの画像。A. 洗浄前代表ウェル：d5、633個の対物レンズ（ビーズ）がカウントされた。B. 洗浄後の代表ウェル： D5、605個の対物レンズ（ビーズ）をカウント。

結論

MAGPIXマルチプレックスアッセイを成功させるためには、高いビーズ保持率が不可欠である。MAGPIXビーズをAquaMax 4000マイクロプレートウォッシャーで96ウェルマイクロプレート内で洗浄したところ、LifeSepマグネットプレートホルダーを使用し、上記のように最適化された設定により、95%のビーズがウェル内に保持されました。AquaMaxウォッシャーの高度に調整可能な設定と交換可能なウォッシュヘッドは、あらゆるアッセイに究極の柔軟性と最適化を提供します。

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