AAV プラスミド バイオマニュファクチャリングで広く使用されている微小ウイルス
AAVプラスミドとは？
AAV (Adeno-Associated Virus)は、バイオマニュファクチャリングで広く使用されている微小ウイルスで、その限られた複製とヒト免疫原性の低さが好まれています。遺伝子導入用の高産生なウイルスベクターを製造するには、プラスミドDNAの製造やその他の複雑な工程を含む複雑なバイオ製造プロセスが必要です。
AAVプラスミド製造ワークフロー
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1. セル培養： AAV DNAベクター構築とプラスミド増幅。組換えAAV粒子の生成に必要な全ての因子をコードするプラスミドの調製と増幅を行います。
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2. 培養条件のアダプター： プロセス要件に応じて、3Dまたは2D形式を含む懸濁培養または付着培養システムを最適化します。
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3. AAVベクターの生産：AAVベクターDNAを一過性にセルに導入するか、2-3日の複製と発現のために安定した細胞株を樹立します。
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4. AAVの回収： 細胞培養液をフィルターにかけ、遠心分離して残渣を除去し、AAVベクターを濃縮します。タンジェンシャルフローろ過（TFF）を使用してさらに精製することもできます。細胞培養液または細胞溶解液からの AAV 粒子の捕捉および回収は、沈殿、遠心分離、クロマトグラフィー、タンジェンシャルフローろ過など、組み換えタンパク質に使用される標準的な技術に従って行います。
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5. AAVの精製： 超遠心分離と親和性またはイオン交換などのクロマトグラフィーを用いて、高純度のAAVベクター調製を行います。プロセス全体を通して品質管理を維持します。
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6. AAV の力価測定： 最高力価を同定するためのAAVベクターの定量的・定性的分析は、リアルタイムPCRを含む標準的な技術に従って行うことができます。
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7. 哺乳類細胞の形質導入： 精製されたAAV粒子は、IPSC、3Dオルガノイド、CAR-T細胞療法などの標的哺乳類細胞株の形質導入に使用できます。
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8. クローンスクリーニングと選択： うまく形質導入されたクローンを同定するには、クローンスクリーニングが必要です。価値の高いクローンの選択とプールの濃縮は、ハイスループット自動化メソッドに従って実行できます。
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9. 不均一性の解消とシングルセル分離： クローン性プールの不均一性は、シングルセル分離技術と画像ベースの分析によって解消され、確立されたAAV導入細胞株の単クローン性が証明されます。
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10. エキスパンションとキャラクタリゼーション：ハイコンテントイメージャー自動化ソリューションやELISAアッセイにより、標的細胞株のダウンストリームキャラクタリゼーションを行えます。
AAVプラスミド生産ワークフローを最適化する革新的なソリューション
Molecular Devicesは、AAVプラスミド製造の複雑さを理解しています。当社の一連の先進技術ソリューションは、お客様のワークフローの各段階をサポートし、最適化するために綿密に設計されています。精度、効率性、拡張性に重点を置き、お客様のAAVプラスミド生産プロセスの各ステップにおける卓越性を追求し、業界をリードする成果をお約束します。
QPix™ 微生物コロニーピッカー
AAVワークフローにおける応用：
- AAV DNA ベクター構築およびプラスミド展開の段階で使用します。
- 目的のプラスミド構築物を封じ込めたコロニーを効率的にピッキングします。
- 特異性表現型を持つコロニーのスクリーニングに使用でき、適切なプラスミドコンストラクトを確実に選択できます。
特長：
- 1時間あたり最大3,000コロニーをピッキング。
- 様々な微生物と選択方法に対応。
- UV光除菌とピン洗浄で無菌性を確保。
- 正確なコロニーセレクションのための複数のイメージングモード。
- 自動プレーティングおよびストリーキング機能。
- さまざまなスループットニーズに対応する拡張可能な自動化オプション。
ClonePix 2 自動動物細胞コロニーピッキングシステム
AAVワークフローにおける応用：
- クローンスクリーニングとセレクションの段階で使用します。
- タンパク質の生産性などに基づいて、価値の高いクローンをスクリーニングおよび選択します。
特長：
- 価値の高いクローンを選択するための自動化システム。
- 最適な細胞株を見つける確率を高める。
- 蛍光を含む複数の検出方法を提供。
- UV光とピン洗浄で無菌状態を維持。
- 分離が明瞭なコロニー形成のための半固形培地を使用。
CloneSelect Imager FL
AAVワークフローにおける応用：
- Expansion & Characterizationフェーズで使用します。
- 自動動物細胞のイメージングと解析を行い、単クローン性を確保します。
- 遺伝子編集の検証に使用可能です。
特長：
- 白色光イメージングと蛍光イメージャーの両方を提供。
- コンフルエンス解析とモノクローナリティ保証を自動生成。
- 96ウェルプレートを2分未満で画像取得できる迅速な取得時間。
- CHO、HEK、iPSCを含む様々な細胞種に対応。
- 高解像度の画像とインテリジェントな解析を提供します。
DispenCell シングルセルディスペンサー
AAVワークフローにおける応用：
- 不均一性の解消とシングルセル分離の段階で使用します。
- 樹立したAAV導入細胞株の単クローン性を確保するシングルセル分注装置です。
特長：
- クローン性を即座にトレーサビリティをもって証明。
- 穏やかな取り扱いにより、細胞の生存率を維持。
- コンパクトなデザインで、様々な実験環境に対応。
- クロスコンタミネーションを防ぐ使い捨てチップを使用。
- キャリブレーション不要の直感的なインターフェース。
AAVプラスミドを支援する製品・サービス
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DispenCell
シングルセルディスペンサー
効率的で信頼性の高いシングルセルの単離を可能にします
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QPix
微生物コロニーピッカー
最大3000コロニー/時間のピッキングが可能な自動微生物スクリーニングシステム
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CloneSelect Imager
(CSI and CSI FL)
蛍光および明視野での高速な画像取得とモノクローナリティレポートの作成機能を含む
インテリジェントな画像解析を実装するシステム -
ClonePix 2
自動動物細胞コロニーピッキングシステム
モノクローナル抗体やバイオ医薬品を生産する細胞株樹立ワークフローの自動化ソリューション
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マイクロプレートリーダー
ソリューション
高感度で堅牢なマイクロプレートリーダーと直感的で使いやすいデータ取得・解析ソフトウェアソリューションで生産性を向上