Application Note MetaXpress®6.5ソフトウェアを使用した
カーブフィット処理による実験結果の分析

はじめに

マシュー・ハマー｜アプリケーションサイエンティスト｜モレキュラー・デバイス

MetaXpress®6.5（MX6.5）ハイコンテント画像取得・解析ソフトウェアの新しいカーブフィット処理アルゴリズムは、データの可視化と二次解析を容易にするために設計されました。このソフトウェアを使用すると、一連のデータポイントに最適なカーブフィット処理を生成できます。4パラメータ・ロジスティックなどの複数の関数と、EC50やベンチマーク応答などの複数の曲線出力により、データを最適に表現するグラフや曲線を生成することができる。ここでは、毒性アッセイを例に、化合物のEC50値を定義するための用量反応関係を生成する方法を示します。

HeLa細胞を用いた多重毒性アッセイ

細胞は、384ウェルの黒色透明底マイクロプレートに2,000個/ウェルでプレーティングされ、37℃、5％CO2で24時間インキュベートされた。次に、細胞を1:3連続希釈の抗がん化合物で48時間、4重反復処理した。細胞をHoechst 33342（8 μM）、MitoTracker Orange（100 nM）、Calcein AM（1.25 μM）の溶液で30分間染色した後、ImageXpress® Microハイコンテントイメージングシステムで画像化した。生細胞画像は、MetaXpress 6.5のMulti-Wavelength Cell Scoringモジュールで解析した。このモジュールは、各波長で陽性となった細胞の割合だけでなく、測定された細胞や対物の総数、平均数、サイズ、面積、強度値を含む複数のリードアウトを生成する。データおよびカーブフィット処理によるグラフは、この結果から作成された。

カーブフィット処理によるデータ分析の強化

細胞ベースアッセイの結果を解釈するための濃度反応曲線を作成するため、MX 6.5でプレートに注釈を付けました。Annotate Wells ウィンドウで、グループタイプ（ネガティブコントロール、ポジティブコントロール、テスト）を選択し、ウェル処理に使用した化合物の名前を入力し、化合物の開始濃度と細胞処理に使用した希釈に対応する値を入力しました。Zの計算には陽性対照と陰性対照を用いた。プレートの注釈は、データベースに保存するか、またはコンピュータに保存するファイルとして保存し、取得した特異性プレートに適用することができます。

分析し注釈を付けたプレートからグラフを作成するには、Graphタブに移動し、プレーティングする測定値を選択します。この例では、測定値（陽性セル）対濃度（μM化合物）を表示するように選択しました。グラフが好みのデザインになったら、カーブフィットボタンを選択し、データを正確にトレースするカーブを追加します。十数種類のフィットメニューから、データを最もよく表すものを選ぶことができる。用量反応を分析したいこのケースでは、4パラメータロジスティック曲線を選択し、データポイントの平均値を中心にカーブフィット処理を行い、漸近オプションが選択されていることを確認し、読み出しにEC50を指定した。

カーブフィット処理と選択した測定値から得られたデータをタブ区切りファイルにエクスポートし、グラフを画像ファイルとして簡単に保存した。

結論

MetaXpress®6.5ソフトウェアのカーブフィット処理アルゴリズムの有用性は、毒性化合物の希釈系列に対する生細胞応答をプロットすることで実証された。プレートに注釈を付け、データをグラフにプロットし、IC50値や化合物のベンチマーク用量または濃度を含むさまざまな曲線とアッセイの出力を作成する機能は、多くの生物学的アッセイに不可欠です。カーブフィット処理機能が統合されたMX 6.5は、オールインワンの画像取得およびデータ解析ソフトウェアです。