TRF、TRフレット、HTRF

フルオレセインのような標準的な蛍光色素を使用

TRF / TR-FRET（HTRF）の概要

時間分解蛍光(TRF)

蛍光強度(FI)測定では、フルオレセインのような標準的な蛍光色素を使用します。蛍光色素の発光はナノ秒オーダーと短命です。サンプルの励起と発光の測定は同時に行われます。マイクロプレートリーダーは、発光測定から励起光を除外するのに非常に優れていますが、励起光は、ウェルやサンプル中の物質から放出される短寿命の光とともに、しばしば高いバックグラウンドの原因となります。

時間分解蛍光法（TRF）は、長寿命の蛍光を発するランタニド蛍光体（ユーロピウムやテルビウムなど）を用いることで、バックグラウンドを低減します。この長寿命蛍光はミリ秒単位で持続するため、パルス光源（フラッシュランプなど）で蛍光体を励起した後、遅延時間をおいてからシグナルを測定する（「計数窓」）ことで、短寿命蛍光（ナノ秒単位で持続）が落ち着いてから測定を行うことができます。時間分解蛍光を用いたアッセイでは、シグナル対ノイズ比が飛躍的に向上します。最も頻繁に使用されるランタノイドは、ユーロピウム、テルビウム、サマリウムです。これらは一般的にキレート複合体またはクリプテート複合体として使用され、シグナル強度と安定性に優れています。

ホモジニアス時間分解蛍光 (HTRF)

HTRFは、生体分子の相互作用を検出するためにシスバイオが開発した汎用性の高いTR-FRET技術です。典型的なHTRFアッセイでは、ドナーとしてユーロピウムクリプテートを、アクセプターとして有機蛍光体d2を用います。ドナーとアクセプターは、エピジェネティクス、バイオマーカー定量、GPCRシグナル伝達などを含むアプリケーションのために、様々な生体分子を標識するために使用することができます。HTRFアッセイには、シスビオのHTRF適合認定を受けたTRF検出モードのマイクロプレートリーダーが必要です。