蛍光とは何か?
蛍光とは、原子や分子が特定の波長の光(励起:Excitation)を吸収した後、より長い波長の光を短時間で放出(Emission)する性質です(図2)。励起ピークと発光ピークの間の距離はストークスシフトと呼ばれ、蛍光色素に依存します(図1)。
蛍光は、外部光源によってサンプルを特定の波長で励起します。適切な波長で励起されると、分子は基底状態から励起状態に形質転換します。分子が基底状態に戻ると、エネルギーは熱(エネルギーの損失)と、よりエネルギーの低い別の長い波長の光という形で放出されます(図3)。
蛍光検出の仕組みは?
蛍光強度(FI)検出機能付きマイクロプレートリーダーは、通常キセノンフラッシュランプやLEDなどの光源を使用し、蛍光体(蛍光分子)を特定の波長で励起します。サンプルの励起に必要な波長は、特異性波長のフィルターか、必要な波長に調整されたモノクロメーターのいずれかを使用して選択することができます。
蛍光体は次に、第二のフィルターまたはモノクロメーターによって選択された異なる波長の光を放出します。この放出された蛍光は光電子増倍管(PMT)で検出され、試料の蛍光強度は相対蛍光単位で表されます。