パッチクランプ電気生理学
パッチクランプ法は、イオンチャネルの挙動を理解するための汎用性の高い電気生理学的ツールである。あらゆるセルがイオンチャネルを発現していますが、パッチクランプ法で研究する最も一般的な細胞は、ニューロン、筋繊維、心筋細胞、単一イオンチャネルを過剰発現している卵母細胞などです。
単一イオンチャネルのコンダクタンスを評価するには、微小電極が細胞膜と高抵抗のシールを形成し、目的のイオンチャネルを封じ込めた細胞膜のパッチを取り除きます。あるいは、微小電極が細胞膜にシールされている間に、この小さなパッチを破裂させ、電極が細胞全体に電気的にアクセスできるようにすることもできる。次に電圧を印加してボルテージクランプを形成し、膜電流を測定する。電流クランプは、膜電位と呼ばれる膜電圧の変化を測定 するためにも使用できる。細胞膜内の電圧や電流の変化は、チャネルをブロックしたり開いたりする化合物を適用することで変化させることができる。これらの技術により、研究者は、イオンチャネルが正常および疾患状態の両方でどのように振る舞うか、また、さまざまな薬物、イオン、その他の分析物がこれらの状態をどのように変化させるかを理解することができます。
アクソンインスツルメントを用いたパッチクランプワークフロー
Axon Instruments® のポートフォリオは、アンプ、デジタイザー、ソフトウェア、アクセサリーを含むパッチクランプの包括的なソリューションを提供します。当社のクラス最高のインストゥルメンテーションは、最小のシングルチャンネルから最大のマクロ記録まで、パッチクランプ技術実験の全範囲を容易にします。Axon pCLAMP 11 Software Suiteを追加することで、合理的なワークフローが実現し、高度で効率的な実験と、より質の高いデータ生成が可能になります。
電気生理学ラボのセットアップについて詳しく知る
-
ステップ1：ソリューションの準備
内溶液と外溶液を作る。浸透圧とpH値を調整する。
-
ステップ2：細胞または脳のスライスを準備する
培養セル、単離されたニューロン、脳のスライス、または動物全体を準備する。
-
ステップ3：ピペットを引き、磨く
記録電極を準備する。ガラス管を引き、ピペットチップを磨く。
-
ステップ4：灌流システムのセットアップ
灌流システムとデータ収集ソフトウェアをセットアップする。システムがシールドされていることを確認する。
-
ステップ5：セルにパッチを当てる
マニピュレーターを使い、ピペットで細胞膜に触れる。高抵抗の電気シールが形成されることを確認する。
-
ステップ6：信号の取得と増幅
信号は増幅される。最良の結果を得るためには、研究に適したタイプのアンプを使用していることを確認する。
-
ステップ7：信号のデジタル化
その後、アナログ信号はデジタル化され、信号を分析できるようになる。
-
ステップ8：データ収集と分析
pCLAMP 11ソフトウェアスイートでは、より長く、より洗練されたプロトコルをプログラムすることができ、より迅速なデータ解析と正確な測定が可能。
