蛍光偏光

溶液中の結合現象をモニターするために広く用いられている技術

蛍光偏光 G因子

偏光はミリP（mP）の相対単位で表され、偏光した励起光の方向に対して検出された垂直（Iperp）と平行（Ipara）の蛍光強度値の測定値から計算される（下式を参照）。G因子（G）は、偏光値に影響を与えるフィルター、偏光子、モノクロメーターなどの光学部品の影響を補正するために使用されます。

他の結合アッセイに対するFPの優位性

FPは、受容体-リガンド相互作用、タンパク質-DNA相互作用、タンパク質分解、膜流動性、酵素アッセイなどの研究に使用できます。FPアッセイは、キナーゼ、ホスファターゼ、プロテアーゼ、Gタンパク質共役型受容体（GPCR）、核内受容体など、多種多様なターゲットの研究に使用されています。

以下の利点により、FPアッセイは特にハイスループットスクリーニングに適しています：

• ホモジニアス（洗浄ステップ不要）
• 非放射性
• レシオメトリック（単一波長）
• 小型化可能

SpectraMaxマルチモードマイクロプレートリーダーでのIMAPホスホジエステラーゼアッセイ

Molecular Devices社のIMAP® テクノロジーは、キナーゼ、ホスファターゼ、ホスホジエステラーゼの迅速、ホモジニアス、非放射性アッセイを可能にし、アッセイ開発とハイスループットスクリーニングの両方に適しています。IMAPアッセイは、ナノ粒子上に固定化された金属配位錯体へのリン酸の結合に基づき、IMAP結合体がリン酸化基質に結合すると、ペプチドの分子運動が変化し、ペプチドに結合した蛍光標識の蛍光偏光（FP）が増加します（図1、左）。このアッセイのTR-FRETバージョンでは、テルビウム（Tb）ドナーが含まれるため、リン酸化基質が存在すると蛍光エネルギー移動が起こります（図1、右）。このアッセイは時間分解モードで検出されるため、アッセイ成分やスクリーニング中の化合物による蛍光干渉がほとんどない。TR-FRETは、基質のサイズや濃度にも柔軟に対応できます。

環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ（PDEs）は、様々な生物学的プロセスに関与するセカンドメッセンジャーであるcAMPとcGMPのホスホジエステル結合を分解する酵素群です。PDE酵素は、心臓病、認知症、うつ病などの領域で臨床的に重要であることから、薬剤の標的として重要なクラスとして浮上してきました。ここでは、SpectraMax® マルチモードマイクロプレートリーダーと SoftMax® Pro ソフトウェアを使用した IMAP テクノロジーによる PDE 酵素の希釈および阻害曲線の測定方法を紹介します。

IMAP FPおよびTR-FRETホスホジエステラーゼアッセイの原理