核酸(DNA/RNA)の検出、定量法、分析 マイクロプレートフォーマットでの核酸の定量法と分析
核酸とは何か?
核酸は細胞内に存在する巨大で複雑な生体分子です。生物の遺伝物質として機能し、すべての生物の形成と機能の命令を封じ込めたものです。核酸は通常、天然に存在する2つの形態で発見されるDNA(デオキシリボ核酸)とRNA(リボ核酸)です。
DNAとRNA
DNAとRNAはヌクレオチドで構成され、それぞれ炭素数5の糖、窒素塩基、リン酸基からなります。DNAは対になったヌクレオチドの二本鎖で形成されますが、リボ核酸(RNA)は通常一本鎖です。DNAのヌクレオチドはアデニン、シトシン、グアニン、チミンですが、RNAはチミンの代わりにウラシルを含みます。DNAの塩基配列は遺伝子と呼ばれる単位に組織化され、個々のタンパク質をコードする情報を封じ込めます。遺伝子のDNAは転写されて遺伝子のRNAコピーが作られ、それがタンパク質を合成する鋳型となります。
遺伝子の塩基配列を変化させるDNA損傷や突然変異は、正常な細胞機能を破壊する機能不全タンパク質をもたらす可能性があります。癌は、遺伝子の突然変異がいかに細胞行動の正常な制御を乱し、制御不能な細胞増殖をもたらすかの典型的な例です。遺伝子の機能と、病気を引き起こす遺伝子の変化に関する研究は、今後も新たな治療法の開発につながるでしょう。
核酸(DNA/RNA)の検出、定量法、分析を支援する製品・サービス
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SpectraMax iD3/iD5
マルチモードマイクロプレートリーダー大型タッチスクリーンを備えた高感度マイクロプレートリーダー
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Gemini XPSおよびEM
マイクロプレートリーダーフィルター不要の蛍光検出
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SpectraMax ABS / ABS Plus
マイクロプレートリーダーフィルター不要で幅広いアッセイを迅速に行える吸光プレートリーダー
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SpectraMax i3x
マルチモードマイクロプレートリーダー研究ニーズに合わせて進化できるマイクロプレートリーダー
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SpectraMax Mシリーズ
マルチモードマイクロプレートリーダー妥協ない性能と低価格を両立したマルチモードマイクロプレートリーダー
核酸の検出と定量法
シーケンシングや遺伝子編集など、増え続ける分子生物学的手法の一環として、核酸はしばしばセルから精製されます。下流のアプリケーションで使用される前に、核酸の検出と定量がUVまたは蛍光分光光度法を用いて行われます。従来はキュベットで個別に測定されていましたが、現在ではマイクロプレートでサンプル分析が日常的に行われています。
Molecular Devicesは、核酸の検出、定量法、および分析のための完全なワークフローソリューションを提供します。当社のアプリケーションノートでは、マイクロプレートフォーマットでの核酸の定量法と分析法を紹介しており、他の方法と比較してハイスループットを実現し、結果の自動計算も可能です。
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DNA/RNA吸光度測定
分光光度計またはマイクロプレートリーダーで 260 nm で測定した DNA サンプルの吸光度を用いて、濃度を算出することができます。DNAの吸光度定量は、マイクロプレートフォーマットで約0.25μg/mLから約125μg/mLの範囲のサンプルで機能します。
吸光マイクロプレートリーダーで吸光度を測定する方法については、アプリケーションノートをご覧ください。
SpectraMaxマイクロプレートリーダーを使用したDNAおよびRNAの吸光度測定 >
SpectraMax ABS/ABS Plusマイクロプレートリーダーでの少量、ハイスループットのDNAおよびタンパク質検出 > -
核酸の蛍光定量法
DNAの定量は分子生物学において重要なステップであり、正確性、信頼性が要求され、次世代シーケンシングのようなアプリケーションではますます少量のサンプルしか使用できなくなります。分光光度法によるDNA定量と比較して、フルオロメトリック法は、感度の大幅な向上、一本鎖DNA(ssDNA)やRNAに対する二本鎖DNA(dsDNA)の高い選択性、汚染物質(タンパク質や炭水化物分子)に対する耐性の向上などの主な利点を提供します。
核酸の蛍光定量法に関するアプリケーションノートをいくつかご紹介します。
SpectraMax Quant dsDNAアッセイキットを用いたdsDNAサンプルの定量 >
Quant-iT PicoGreen dsDNA試薬とSpectraMax蛍光マイクロプレートリーダーによる二本鎖DNAの定量化 > -
SNPジェノタイピング
ジェノタイピングとは、DNAの塩基配列を調べることにより、個体間の遺伝的差異を分析するプロセスです。一塩基多型(SNPs)は最も一般的な遺伝的多様性の一つで、特異性遺伝子座における一塩基の変異からなります。SNPジェノタイピングは、様々な生物種における疾患関連変異の同定に非常に有用であることが証明されており、その結果、SNP検出のための多くの技術が開発されてきました。
SpectraMaxマイクロプレートリーダーでのKASPジェノタイピングテクノロジーによるSNP検出 >