Application Note ScanLater Western Blot Systemと
StakMaxマイクロプレートスタッカーの自動化

はじめに

ScanLater Western Blot Systemは、従来の Western Blotプロトコルを改良し、時間分解蛍光（TRF）で検出するユーロピウム標識二次抗体を採用しています。この基質フリーの検出法は、酵素法よりも正確な定量を可能にし、従来の化学発光 Western Blot法に匹敵する高フェムトグラム領域でのタンパク質検出感度を実現します。シグナルは非常に安定しており、ブロットは最終洗浄ステップから30日後まで読み取ることができます。ScanLater WesternBlot Assay Kitは、SpectraMax Paradigm、i3、i3xマルチモードマイクロプレートリーダーに追加できます。

ScanLaterシステムのシグナル安定性は、不安定な酵素検出法では不可能なWestern Blotのハイスループットなバッチ処理を可能にします。ScanLaterを搭載したSpectraMax i3xプレートリーダーとStakMaxマイクロプレートスタッカーを組み合わせれば、20枚、40枚、あるいは50枚のブロットのスタックを自動的に読み取ることができます。このテクニカルノートでは、ウェスタンブロットメンブレンをセットしたScanLaterブロットホルダーを20プレートマガジンに装填した。データファイルのプレーティング、プレートハンドリング、データ生成、データ保存を処理するカスタムスクリプトを作成しました。

スクリプトのセットアップ

SoftMax ProソフトウェアのOperationsタブで、「Plate Stacker」を選択します。

開いたStakMaxウィンドウで「Scripting」を選択し、file path「New」を選択して新しいscriptを作成します。これにより、ソフトウェアの新しいウィンドウが開き、custom scriptを作成するために組み合わせることができるcommandのメニューが表示されます。ScanLaterオートメーションの場合、scriptは以下のように設定します：

scriptを実行する前に、western blot protocolを作成する必要があります。上のscriptでは、scriptは'Western blot auto.spr'と呼ばれ、scriptの最初の行にその場所が示されているので、ソフトウェアで自動的に開くことができます。Save Document As'ステップは重要で、これはデータ（.sda）ファイルを作成し、各ブロットの画像（.tif）ファイルを保存するフォルダーを作成するからです。このステップは自動化を進めるために必要です。

ブロットの読み取りが終わると、最終データセットが保存され、プレートが元の順番に再スタックされます。データはSoftMax Proソフトウェアで、定量解析用のカスタムExcel解析モジュールを使用して解析することができます。

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