Application Note ScanLater™ウェスタンブロット検出システムと
StakMaxマイクロプレート処理システムの自動化

はじめに

ScanLaterウエスタンブロット検出システムは、従来のウエスタンブロットプロトコルを改良し、時間分解蛍光（TRF）で検出するユーロピウム標識二次抗体を採用しています。この基質フリーの検出法は、酵素法よりも正確な定量を可能にし、従来の化学発光ウェスタンブロット法に匹敵する高フェムトグラム領域でのタンパク質検出感度を実現します。シグナルは非常に安定しており、ブロットは最終洗浄ステップから30日後まで読み取ることができます。ScanLaterウェスタンブロット検出カートリッジは、SpectraMax Paradigm、i3、i3xマルチモードマイクロプレートリーダーに追加できます。

ScanLaterシステムのシグナル安定性は、不安定な酵素検出法では不可能なウェスタンブロットのハイスループットなバッチ処理を可能にします。ScanLaterを搭載したSpectraMax i3xリーダーとStakMaxマイクロプレートハンドリングシステムを組み合わせれば、20枚、40枚、あるいは50枚のブロットのスタックを自動的に読み取ることができます。このテクニカルノートでは、ウェスタンブロッティングメンブレンをセットしたScanLaterブロットホルダーを20プレートマガジンに装填した。データファイルのプレーティング、プレートハンドリング、データ生成、データ保存を処理するカスタムスクリプトを作成しました。

スクリプトのセットアップ

SoftMax ProソフトウェアのOperationsタブで、「Plate Stacker」を選択します。

開いたStakMaxウィンドウで「スクリプト」を選択し、ファイルパス「新規」を選択して新しいスクリプトを作成します。これにより、ソフトウェアの新しいウィンドウが開き、カスタムスクリプトを作成するために組み合わせることができるコマンドのメニューが表示されます。ScanLaterオートメーションの場合、スクリプトは以下のように設定します：

スクリプトを実行する前に、ウェスタンブロットプロトコルを作成する必要がある。上のスクリプトでは、プロトコルは'ウエスタンブロットauto.spr'と呼ばれ、スクリプトの最初の行にその場所が示されているので、ソフトウェアで自動的に開くことができる。Save Document As'ステップは重要で、これはデータ（.sda）ファイルを作成し、各ブロットの画像（.tif）ファイルを保存するフォルダーを作成するからである。このステップは自動化を進めるために必要である。

ブロットの読み取りが終わると、最終データセットが保存され、プレートが元の順番に再スタックされる。データはSoftMax Proソフトウェアで、定量解析用のカスタムExcel解析モジュールを使用して解析することができます。

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